عتاب عبد الأمير ابراهيم طه الموسوي

الخلاصة :

     يعد انزيم اليوريكيز [EC 1.7.3.3] من إنزيمات الأكسدة والاختزال يعمل على أكسدة حلقة البيرمدين الموجودة في حامض اليوريك .

     تهدف الدراسة الحالية البحث عن مصادر مايكروبية محلية لإنتاجها انزيم اليوريكيز وبمواصفات ملائمة للتطبيقات الطبية , تم اختبار 15 عزلة بكتيرية لمعرفة كفاءتها على إنتاج انزيم اليوريكيز بأستخدام الأوساط الصلبة والمزارع المغمورة في مرحلتي الغربلة الأولية والثانوية , اختيرت العزلة P.aeruginosa 7 لكونها الأفضل في إنتاج الانزيم .

   حُددت الظروف المثلى لإنتاج انزيم اليوريكيز وذلك بأستخدام عصير التمر وبنسبة 0.05% كمصدر كاربوني واستخدام 0.3% من حامض اليوريك كمادة حاثة للأنزيم و 0.75% من فوسفات البوتاسيوم ثنائية الهيدروجين و 0.1% من كلوريد المغنسيوم .

   كما وحُددت الظروف التنموية الأخرى المثلى لإنتاج الانزيم , اذ كان الاس الهيدروجيني الامثل لإنتاج الانزيم هو 6.5 اما فترة الحضانة المثلى فتكون بعد 24 ساعة وبدرجة حرارة 37 مْ اما سرعة الرج فكانت عند 150 دورة \ دقيقة وحجم لقاح 1% من حجم الوسط .

   تم تنقية انزيم اليوريكيز من الوسط الزرعي لبكتريا P. aeruginosa بأستخدام خطوتين :

الاولى : الترسيب بواسطة استخدام كبريتات الأمونيوم 70% .

الثانية : التبادل الايوني بأستخدام المبادل الايوني DEAE –Cellulose إذ تم الحصول على عدد مرات تنقية 7.2 مرة و حصيلة انزيمية 42.8% وبلغ الاس الهيدروجيني الامثل لفعالية الانزيم (9 , 8.5) وان الانزيم ثابت في مدى أس هيدروجيني بين (9.5 , 8) . وان درجة الحرارة المثلى لفعالية الانزيم تكون هي 35 مْ ويبقى الانزيم محتفظاً بفعاليتهِ كاملةً عند درجة حرارة (40 – 25) مْ ولمدة 20 دقيقة .

أظهرت الدراسات الحركية لانزيم اليوريكيز ان العلاقة بين تركيز الركيزة (حامض اليوريك) وسرعة التفاعل تخضعان الى معادلة ميكالس منتن وقدرت الثوابت الحركية المتمثلة بثابت ميكالس Km والسرعة القصوى Vmax للأنزيم وتم تقديرها بأتباع طرائق ثلاث , إذ بلغت معدلات قيم ثابت ميكالس Km هو 0.0091 ملغم \ مل , اما السرعة القصوى Vmax فقد بلغت 6.68 مايكرومول \ مل . دقيقة , عند استخدام حامض اليوريك كركيزة .

   دُرس تاثير بعض الايونات الفلزية حيث أوضحت النتائج ان كلوريدات النيكل الزئبق و الفضة من مثبطات الانزيم , كما ان استخدام كلوريد الحديد وبتركيز 1 ملي مولر يٌفقد من الانزيم فعاليتهُ 88.93% .

بينما يُعد كلوريد الصوديوم منشطاً قوياً لفعالية الانزيم اذ بلغت الفعالية المتبقية 216.44% عند استخدامهُ بنسبة 1 ملي مولر , كما ويُعد كلوريد المغنسيوم وكلوريد الكالسيوم من المنشطات ايضاً عند استخدامهما بتركيز 5 ملي مولر لتبلغ الفعالية المتبقية (129.62 , 170.35) % .

دُرس الاستخدام الطبي لانزيم اليوريكيز المنتج من العزلة المحلية P. aeruginosa 7 بتحديد تركيز حامض اليوريك في الدم من خلال استخدام انزيم اليوريكيز المستخلص من جذور الفجل الأبيض والمنقى باستخدام المبادل الايوني DEAE – Cellulose وأظهرت النتائج مدى كفاءة الانزيم المنتج محلياً في التقدير الكمي لتركيز حامض اليوريك في الدم من خلال مقارنته مع نتائج قياسية تم قياسها بواسطة العدة التشخيصية (RANDOX) .

 

 

 

 

 

 

اغلاق القائمة