الخلاصة :

     يعد انزيم اليوريكيز [EC 1.7.3.3] من إنزيمات الأكسدة والاختزال يعمل على أكسدة حلقة البيرمدين الموجودة في حامض اليوريك .

     تهدف الدراسة الحالية البحث عن مصادر مايكروبية محلية لإنتاجها انزيم اليوريكيز وبمواصفات ملائمة للتطبيقات الطبية , تم اختبار 15 عزلة بكتيرية لمعرفة كفاءتها على إنتاج انزيم اليوريكيز بأستخدام الأوساط الصلبة والمزارع المغمورة في مرحلتي الغربلة الأولية والثانوية , اختيرت العزلة P.aeruginosa 7 لكونها الأفضل في إنتاج الانزيم .

   حُددت الظروف المثلى لإنتاج انزيم اليوريكيز وذلك بأستخدام عصير التمر وبنسبة 0.05% كمصدر كاربوني واستخدام 0.3% من حامض اليوريك كمادة حاثة للأنزيم و 0.75% من فوسفات البوتاسيوم ثنائية الهيدروجين و 0.1% من كلوريد المغنسيوم .

   كما وحُددت الظروف التنموية الأخرى المثلى لإنتاج الانزيم , اذ كان الاس الهيدروجيني الامثل لإنتاج الانزيم هو 6.5 اما فترة الحضانة المثلى فتكون بعد 24 ساعة وبدرجة حرارة 37 مْ اما سرعة الرج فكانت عند 150 دورة \ دقيقة وحجم لقاح 1% من حجم الوسط .

   تم تنقية انزيم اليوريكيز من الوسط الزرعي لبكتريا P. aeruginosa بأستخدام خطوتين :

الاولى : الترسيب بواسطة استخدام كبريتات الأمونيوم 70% .

الثانية : التبادل الايوني بأستخدام المبادل الايوني DEAE –Cellulose إذ تم الحصول على عدد مرات تنقية 7.2 مرة و حصيلة انزيمية 42.8% وبلغ الاس الهيدروجيني الامثل لفعالية الانزيم (9 , 8.5) وان الانزيم ثابت في مدى أس هيدروجيني بين (9.5 , 8) . وان درجة الحرارة المثلى لفعالية الانزيم تكون هي 35 مْ ويبقى الانزيم محتفظاً بفعاليتهِ كاملةً عند درجة حرارة (40 – 25) مْ ولمدة 20 دقيقة .

أظهرت الدراسات الحركية لانزيم اليوريكيز ان العلاقة بين تركيز الركيزة (حامض اليوريك) وسرعة التفاعل تخضعان الى معادلة ميكالس منتن وقدرت الثوابت الحركية المتمثلة بثابت ميكالس K_m والسرعة القصوى V_max للأنزيم وتم تقديرها بأتباع طرائق ثلاث , إذ بلغت معدلات قيم ثابت ميكالس K_m هو 0.0091 ملغم \ مل , اما السرعة القصوى V_max فقد بلغت 6.68 مايكرومول \ مل . دقيقة , عند استخدام حامض اليوريك كركيزة .

   دُرس تاثير بعض الايونات الفلزية حيث أوضحت النتائج ان كلوريدات النيكل الزئبق و الفضة من مثبطات الانزيم , كما ان استخدام كلوريد الحديد وبتركيز 1 ملي مولر يٌفقد من الانزيم فعاليتهُ 88.93% .

بينما يُعد كلوريد الصوديوم منشطاً قوياً لفعالية الانزيم اذ بلغت الفعالية المتبقية 216.44% عند استخدامهُ بنسبة 1 ملي مولر , كما ويُعد كلوريد المغنسيوم وكلوريد الكالسيوم من المنشطات ايضاً عند استخدامهما بتركيز 5 ملي مولر لتبلغ الفعالية المتبقية (129.62 , 170.35) % .

دُرس الاستخدام الطبي لانزيم اليوريكيز المنتج من العزلة المحلية P. aeruginosa 7 بتحديد تركيز حامض اليوريك في الدم من خلال استخدام انزيم اليوريكيز المستخلص من جذور الفجل الأبيض والمنقى باستخدام المبادل الايوني DEAE – Cellulose وأظهرت النتائج مدى كفاءة الانزيم المنتج محلياً في التقدير الكمي لتركيز حامض اليوريك في الدم من خلال مقارنته مع نتائج قياسية تم قياسها بواسطة العدة التشخيصية (RANDOX) .