الخــلاصـــة

تضمنت الدراسة الحالية غربلة عزلات فطرية محليّة لانتخاب الأكفأ منها في انتاج حامض الكوجيك بتنميتها على وسط زرعي صناعي حاوي على الكلوكوز و مدعّم بمستخلص الخميرة و فوسفات البوتاسيوم ثنائية الهيدروجين و كبريتات المغنيسيوم سباعية جزيء الماء . و حددت الظروف المثلى لإنتاج الحامض من العزلتين المنتخبتين بتنميتهما على وسط المولاس المدعّم ببعض المغذيات المشار اليها في الوسط الصناعي . و شملت الدراسة تنقية الحامض من العزلة الأكفأ و توصيفه فضلا عن دراسة بعض الفعاليات الحياتية للحامض المنقى ، و أظهرت النتائج ما يأتي :

أمكن الحصول على 31 عزلة فطرية محليّة عائدة للجنسين Aspergillus spp. و Penicillium spp. خضعت العزلات جميعها لعملية غربلة لتحديد الأكفأ منها في انتاج حامض الكوجيك و اتضح أنّ العزلتين A. fumigatus(24) و A. flavus(29) هما الأغزر انتاجا للحامض اذ تم استعمالهما في مراحل الدراسة اللاحقة .

كما تم تحديد الظروف المزرعية و البيئية المثلى لإنتاج حامض الكوجيك من العزلتين المنتخبتين اذ أمكن الحصول على أعلى انتاج من الحامض و الذي بلغ ( 44.18 و 42.34 ) غم/ لتر باستعمال وسط المولاس المروق تركيز 4.2% (سكريات مختزلة) المدعّم ﺒـ ( 0.25 و 0.1 )% كبريتات الأمونيوم و 0.1% فوسفات البوتاسيوم ثنائية الهيدروجين و 0.05% كبريتات المغنيسيوم سباعية جزيء الماء و بأس هيدروجيني 6 و 4.5 و درجة حرارة ( 35 و 30 )̊ م بتلقيح وسط الانتاج بعدد أبواغ ( 4×10 ⁷ و 4×10 ⁸)بوغ/مل و بظروف حضن ساكنة لمدة ( 18 و 20 ) يوم للعزلتين المنتخبتين، على التوالي .

و أمكن تنقية حامض الكوجيك من راشح المزرعة للفطر A.fumigatus(24) ، و قد شملت خطوات التنقية خطوة الترويق (Clarification) و الترشيح الهلامي باستعمال الهـــلام Sephadex G-150 و أخيرا خطوة البلورة اذ تم الحصول على بلورات حامض الكوجيك المائلة للصفرة .

تم التحري عن نقاوة الحامض قيد الدراسة بطرائق عدة شملت تحديد نقطة الانصهار التي انحصرت ما بين (153 – 153.7 )̊ م ، و قد ظهرت بقعة واحدة عند فصل الحامض بكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC) بقيم (R_f) مقدارها 0.298 و 0.802 باستعمال نظامي الفصل كلوروفورم:ميثانول ، و ماء : حامض الخليك : أسيتون : خلات الأثيل ، على التوالي . و تم احتساب زمن احتجاز الحامض (R_t) باستعمال كروماتوغرافيا السائل عالي الكفاءة (HPLC) الذي بلغ 4.896 دقيقة . استعملت الطرائق الطيفية في توصيف حامض الكوجيك اذ بلغت قيمة الامتصاص العظمى للحامض ( 216 و 269 ) نانوميتر. و تم التعرف على المجاميع الفعّالة للحامض المنقى من خلال طيف الأشعة تحت الحمراء (FTIR spectrum) فضلا عن تحــديد البنيــة التـركيبية للحامض من خلال طيف الرنين النــووي المغناطيسي للبــروتون ¹H NMR و لنظيــر الكربون ¹³C NMR .

كما أثبتت الفعاليات الحياتية لحامض الكوجيك المنقى امتلاكه لفعالية مضادة للأكسدة اذ بلغت IC₅₀ للحامض عند التركيز 175 مايكروغرام/مل مقارنة بفعالية مضاد الأكسدة القياسي Trolox التي بلغت IC₅₀ عند التركيز 37.5 مايكروغرام/مل .

و قد أبدى الحامض قيد الدراسة قابلية مناعية في تنشيط الوظيفة الالتهامية و وظيفة قتل الميكروبات من قبل الخلايا البلعمية العدلة الحبيبية(Neutrophil Granulocytes) لمرضى أخماج المكورات العنقودية للجهاز التنفسي بفروقات معنوية عند التركيز 20 مايكروغرام/ مل و التي أثبتت دوره في تنشيط هذه الوظائف.

و أخيرا أظهر الحامض قابلية تثبيطية ضد بعض الأحياء المجهرية الموجبة و السالبة لصبغة كرام اذ كانت بكتريا Bacillus cerues و B. subtilis و E. coli هي الأكثر تحسسا للحامض.