الخلاصة :–

     إشتملت هذه الدراسة على عزل وتشخيص بكتريا Azotobacter من مصادر مختلفة وتحديد العزلة الاكفأ في إنتاج إندول – حامض الخليك وتطبيق تقنية تقييد الخلايا للعزلة الكفوءة في إنتاج هذا الاوكسين وقد تضمنت الدراسة تنقية الحامض من الخلايا المقيدة , واظهرت النتائج مايأتي :

1-تم عزل 16 عزلة بكتيرية عائدة لجنس ال Azotobacter من مناطق زراعية مختلفة مزروعة بمحصول الجت من محافظتي كربلاء وبابل . خضعت العزلات الست عشرة المستحصل عليها لعملية غربلة لتحديد الأكفأ منها في إنتاج إندول – حامض الخليك تحت ظروف حضن مختلفة وأوضحت النتائج أن العزلة Azotobacter sp. 8a هي الاكفأ في إنتاج الاوكسين المذكور وتم إستخدام العزلة المذكورة في مراحل الدراسة اللاحقة جميعها .

2-تم استخدام طريقة الحجزEntrapment) ) لتقييد (Immobilization) خلايا بكتريا Azotobacter sp. 8a بأستخدام اربع مواد ساندة مختلفة . وأظهرت النتائج أن الأكار – اكار (Agar – agar) يعد الامثل في تقييد الخلايا إذ أعطى انتاجاً أعلى من إندول – حامض الخليك مقارنة بأستخدام المواد الساندة الاخرى . كما درست العوامل المؤثرة في التقييد وتبين أن استخدام تركيز 2% من الأكار- أكار كمادة ساندة بعدد خلايا مقداره (10⁶×3) خلية/ مل أدى الى الحصول على أعلى إنتاج من الاوكسين .

3-تم تحديد الظروف المزرعية المثلى لإنتاج إندول – حامض الخليك من خلايا حرة وأخرى مقيدة للعزلة المنتخبة Azotobacter sp. 8a وقد أمكن الحصول على أعلى إنتاج للأوكسين بأستخدام مسحوق حبوب الذرة بتركيز 0.36 % المدعم بـ0.5% تربتوفان و0.1% كلوريد الصوديوم برقم هيدروجيني إبتدائي 7 وحجم لقاح مقداره 4% من حجم الوسط والحضن تحت ظروف هوائية ساكنة عند درجة حرارة 37 مئوية لمدة 96 ساعة .ولوحظ ثبوتية إنتاج الاوكسين من الخلايا المقيدة للعزلة المنتخبة لاربع دورات تخمرية ثم يبدأ بالانخفاض بعد ذلك في الدورة الخامسة .

4-أمكن استخلاص وتنقية إندول – حامض الخليك من راشح المزرعة للخلايا المقيدة من بكتريا Azotobacter sp. 8a , ﺇذ استخدمت خلات الاثيل في ﺇستخلاص الاوكسين أعقبتها تنقية الأوكسين باستعمال تقنية كرموماتوغرافيا عمود الفصل باستخدام هلام السليكا وأسفرت عملية الفصل عن الحصول على تنقية جزئية للأوكسين , وتم التأكد من نقاوة الأوكسين باستخدام كروموتوغرافيا السائل عالي الكفاءة (HPLC).

5-أعطى إندول – حامض الخليك المنقى من العزلة المستخدمة في هذه الدراسة بقعة واحدة عند فصله بكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC) بقيمة R_f مقدارها 0.878.

6-أسفرت عملية الترحيل الكهربائي عن خلو عزلة الـ Azotobacter sp. 8a قيد الدراسة من البلازميدات مما يشير الى أن الجينات المسؤولة عن انتاج إندول – حامض الخليك في هذه العزلة هي كروموسومية الموقع .