ضمياء مكي حمزة | دراسة تشخيصية جزيئية ومناعية لأنواع الأكريات Eimeria sp. المخمجة للدجاج في محافظتي كربلاء المقدسة وبابل | دكتوراه فلسفة في علوم الحياة |
الخلاصة
اجريت هذه الدراسة لبيان نسبة انتشار طفيلي الايميريا المسببة لخمج الدجاج وأنواعه في كل من محافظتي كربلاء وبابل باتباع عدد من الطرائق التشخيصية منها الطرق الروتينية والتي تشمل الفحص السريري ويتبعها الفحص العياني ثم اجراء الفحص المجهري لغرض تشخيص العينات الموجبة.
لوحظ خلال الدراسة الحالية حصول ارتفاع و انخفاض في نسبة الخمج خلال اشهر السنة بسبب التغير الكبير في درجات الحرارة ونسبة الرطوبة في العراق بين الاشهر أذ اظهرت الدراسة ان اعلى نسبة للخمج في كل من مدينتي كربلاء وبابل كانت في شهر كانون الاول (23.12% ) واقل نسبة كانت في شهر تموز (1.87 % ).
جمعت في هذه الدراسة 200 عينة من براز الدجاج المخمج بالاكريات وامعائه لمدة 12 شهرا ابتداء˝ من شهر اب 2013 الى شهر تموز 2014 وشخص منها 160 عينة موجبة اعتمادا على الفحص المجهري والتي بدورها خضعت للمرحلة الثانية من الفحص لغرض التشخيص النوعي الدقيق للانواع الايميرية المسببة للاكريات في الدجاج باعتماد الطرق الجزيئية باستهداف منطقة ITS1 للحامض النووي DNA المشفرة للحامض النووي الرايبوسومي وهذه التقنيات تشمل كل من تقنية qRT-PCR وConventional PCR , وتوصلت الى تشخيص ثلاثة انواع وهي Eimeria tenella التي شكلت النسبة الاكبر من مجموع العينات الموجبة (66.8 %) وجاء بعدها النوع Eimeria necatrix الذي شكل نسبة (30 % ) واخيرا النوع Eimeria maxima والذي شكل (3.13%).
حللت الدراسة الحالية تتابعات الحامض النووي لخمس عشرة عينة (خمس عينات من كل نوع من الانواع الايميرية الثلاثة) في شركة Bioneer الكورية أذ تم تحليل متعددة اصطفاف تسلسل القواعد النيتروجينية (Multiple sequence alignment analysis) لمنطقة ITS 1 لناتج فحص تفاعل تسلسل البلمرة PCR للنوع Eimeria باجراء مقارنة بين تسلسل القواعد للعزلات المحلية مع عزلات عالمية مسجلة في بنك الجينات لموقع NCBI-BLAST واثبتت المقارنة دقة الفحص الجزيئي المتبع في الدراسة الحالية ودقة التشخيص للانواع الثلاثة .
كما اجري تحليل الشجرة الوراثية Phylogenetic relationship tree analysis باستخدام برنامج (MEGA 6) أذ تم استخدام تحليل الشجرة الوراثية من نوع (Test UPGMA tree ) (Unweighted Pair Group Method with Arithmetic) لمقارنة الانوع الايميرية الثلاثة مع الانواع الاخرى لطفيلي الايميريا المسجلة عالميا ووجدت الدراسة الحالية ان نسبة التماثل في تتابع الحامض النووي للنوع E.tenella مع النوع E.tenella ((JX853830.1) في بنك الجينات لموقع NCBI –BLAST كانت تتراوح بين 98% و 99% , في حين ان نسبة التماثل بين النوع E.necatrix المحلي والنوع E.necatrix(JX853832.1) المسجل في بنك الجينات للموقع NCBI-BLAST تراوحت بين 91% و100% ونسبة التماثل بين النوع E.maxima المحلي والنوع (JX853828.1) E.maxima في بنك الجينات للموقع NCBI-BLAST كانت 98% .
اجري نوع اخر من التشخيص وهو التشخيص المناعي بتقنية الامتزاز المناعي Indirect ELISA Technique لتشخيص الاجسام المضادة من النوع IgY في مصول الدجاج المخمجة تجريبيا بنوعين من الايميريا E.tenella وE.necatrix, تم تحديد العينات الموجبة بعد حساب قيمة مستوى الكشف البالغة 0.313 أذ كانت قيمة متوسط الامتصاصية في الدجاج المخمج بالنوع E.tenella (0.96 ±0.029 ) في حين ان قيمة متوسط الامتصاصية في مصول الدجاج المخمج بالنوع E.necatrix كان (0.95±0.029 ) .
اجريت تجربة لقياس امكانية حصول تفاعلات عبورية Cross Reactionsبين نوعي الايميريا المستخدمة في التخميج وتوصلت الدراسة الى امكانية حصول هذه التفاعلات العبورية اذ ان استخدام مصول الدجاج المخمجة بالنوع E.tenella مع المستضدات المحضرة من اكياس البيض المبوغة للنوع E.necatrix اظهر نتيجة ايجابية وكانت قيمة متوسط الامتصاصية (0.75±0.096 ),اما في حالة استخدام مصول الدجاج المخمجة بالنوع E.necatrix مع المستضدات المحضرة من اكياس البيض المبوغة للنوع E.tenella اظهر ايضا نتيجة ايجابية وقيمة متوسط الامتصاصية تساوي (0.75±0.097 ).