الخلاصة

إن الدراسة الحالية يمكن إدراجها ضمن الدراسات التي تحاول ايجاد بدائل للمضادات الحيوية في علاج الفطريات الجلدية، أجريت الدراسة في مختبر الدراسات العليا في كلية التربية للعلوم الصرفة في جامعة كربلاء وفي مركز صيانة وترميم المخطوطات ورعاية الباحثين في العتبة الحسينية المقدسة من المدة 1/11/2020 لغاية 1/11/2021 بهدف دراسة تأثير المستخلص المائي والكحولي لفطر المشروم Agaricus bisoporus ومركبات النانوية (AgawNps، ZnoawNps، AgaaNps، ZnoaaNps) في نمو الفطريات الجلدية Trichophyton rubrum وMicrosporum Canis وبتراكيز مختلفة مقارنة مع المضاد الفطري Clotrimazole . سجل الفطر Agaricus bisoporus الاول بالعراق بالبنك الجيني العالمي Genbank بالرقمين التسلسليين MZ619063.1 و MZ798947.1، بينت نتائج تفاعل البلمرة المتسلسل Polymeraise Chain Reaction(PCR) ان العزلتين التي شخصت مظهرياً احتوت على حزمة مفردة من الحامض النووي المستخلص وتم قياس كمية ونقاوة الـ DNA المستخلص بجهاز (Nanodrop) وكانت نتائج التحليل الجيني (ITS) موجبة وكان الـ (Marker Ladder (100-1500) bp) ، وكما بينت النتائج الجزيئية والمسجلة في البنك الجيني العالمي ومن خلال الشجرة الوراثية ان نسبة التقارب بين الانواع العراقية والانواع العالمية هي (99%) التي تعود إلى الدولة الاتية (India – Netherlands – USA – Oman: Barka –France – France: Lorient – United Kingdom) ، اما نسبة التقارب والتشابه بين الأنواع التي تعود لهذه الدول 100%. وتم فحص المركبات النانوية بمقياس الطيف المرئي للأشعة فوق البنفسجية Spectrophotometer وطيف الأشعة تحت الحمراء Fourier transform in fared (FT–IR) وطيف حيود الأشعة السينية X-ray diffraction (XRD) والمجهر الالكتروني الماسح Scanning Election Microscope(SEM) . أظهرت النتائج باستخدام تقنية Real time PCR (qrt – PCR) ان تعبير الجين Serine protease الخاصة بالفطر Trichophyton rubrum ومجموعة السيطرة The specific primer of B-TUBULIN حيث حصل انخفاض واضح في التعبير الجيني لـ Serine protease في المعاملة (1,10) وازداد في المعاملة (18,22) مقارنة مع نتيجة التعبير الجيني لمجموعة السيطرة التي تعادل تعبيراً جينياً بمقدار (fold chang1). أما بالنسبة لتعبير الجين Serine protease الخاصة بالفطر Microsporum Canis ومجموعة السيطرة The specific primer of B- TUBULIN حيث حصل ازدياد واضح في التعبير لـ Serine protease في كل من المعاملة (27, 24, 13, 9) مقارنة مع نتيجة التعبير الجيني لمجموعة السيطرة التي تعادل تعبيراً جينياً بمقدار (Fold change1). وتبين عن طريق النتائج وجود علاقة عكسية بين قيم ct والتعبير الجيني فكلما زادت قيمتها انخفض التعبير الجيني (ترتبط عكسياً بكمية قالب البداية التي تعني ارتفاع قيمة ct يشير إلى انخفاض مستويات التعبير الجيني أو جين التضخيم). حضرت التراكيز المختلفة 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 من المستخلصات الكحولية والمائية والمركبات النانوية والمضاد الفطري وتم الحصول على النتائج بدلالة قطر المستعمرة على وسط Sabourand Dextrose Agar ووزن المستعمرة على وسط Sabourand Dextrose broth بعد 14 يوماً من الحضن للفطريات المدروسة ودراسة شكل المستعمرات الفطرية على الوسط الزرعي Sabrourand Dextrous Agar فضلاً عن تحضير الشراح المجهرية. أوضحت النتائج ان المركبات النانوية (ZnoaaNps, AgaaNps) أثرت في معدل القطر والوزن الجاف للمستعمرات الفطرية بصورة أكبر في تثبيط نمو Microsporum Canis, Trichophyton rubrum فكان تأثيرهما مشابه لتأثير العقار الطبي Clotrimazole بينما المركبات النانوية (AgaawNps, ZnoawNps) وكانت أقل تأثيراً على معدل القطر والوزن الجاف للمستعمرات الفطرية للفطريات المدروسة. كذلك بينت النتائج إن المستخلص الكحولي والمائي لفطر المشرومAgaricus bisoporus لم تؤثر بشكل ملحوظ بمعدل القطر والوزن الجاف للمستعمرات الفطرية بل إنهما أزادا من معدل النمو للقطر والوزن الجاف للمستعمرات الفطرية مشابهاً بذلك عينة السيطرة. المركبات النانوية ZnoaaNps, AgaaNps كانت أكثر تثبيطاً بمعدل قطر (1, 1.23) mm على التوالي لفطر Trichophyton rubrum و (1.16, 1.03)mm على التوالي لفطر Microsporum Canis. أما بالنسبة للوزن الجاف للمستعمرات الفطرية فكان المركبات النانوية (ZnoaaNps , AgaaNps) الأكثر تثبيطاً للفطرين Trichophyton rubrum و Microsporum Canis بوزن (0.045 , 0.016)mg على التوالي بالنسبة للفطر Trichophyton rubrum و(0.039 , 0.019)mg على التوالي بالنسبة للفطر Microsporum Canis. فكان معدل القطر الأكثر تثبيطاً بالنسبة للفطر Trichophyton rubrum(1.56), (1.10)mm على التوالي و (0.96, 1.06)mm على التوالي للفطر Microsporum Canis. أما بالنسبة للوزن الجاف للمستعمرات الفطرية فكان المركبات النانوية ZnoawNps , AgawNps اقل تأثيراً من المركبات النانوية ZnoaaNps , AgaaNps فكان معدل وزن الجاف لمستعمرات الفطر Trichophyton rubrum الأكثر تثبيطاً (0.032, 0.016)mg على التوالي و(0.040, 0.014)mg على التوالي لفطر Microsporum Canis. أظهرت النتائج تفوق المستخلصات النانوية الخضراء من الزنك والفضة النانوية في تثبيط نمو الفطرين Trichophyton rubrum و Microsporum Canis وهو بذلك مشابه تأثير المضاد الفطري Clotrimazole. تعد هذه الدراسة الأولى من نوعها في مجال تحويل المستخلص الكحولي والمائي لفطر المشروم Agaricus bisoporus إلى مستخلصات نانوية من الفضة والزنك في تثبيط نمو وفعالية الفطريات الجلدية والعمل على ايجاد البدائل للمضادات الفطرية الشائعة الاستعمال. أجريت العديد من الفحوصات المجهرية على الفطريات المدروسة وأوضحت تأثير المعاملات المختلفة على العزول الفطرية وتباين هذا التأثير بين تحلل أو التشوهات في الغزل الفطري وانفصال البروتوبلازم في بعض المناطق وتجمعها في مناطق أخرى فضلا عن اختفاء الكونيدات الصغيرة وتشوه الكونيدات الكبيرة، هناك تشوهات داخلية يمكن ملاحظتها أثناء الفحص المجهري وكان ابرزها تكتل البروتوبلازم في داخل الخلايا الفطرية وانفصال الغشاء البلازمي وهناك تأثير آخر أمكن ملاحظته هو تكون أنواع كلاميدية بغزارة.