الخلاصة

هدفت الدراسة إلى معرفة التأثيرات السمية والمناعية للمركبات الفعالة المعزولة من العكبر العراقيIraqi Propolis والتي تضمنت، Caffeic acid (CA) وCaffeic acid phenethyl ester (CAPE) و Chrysin (CHR)على خط خلايا سرطان الرئة البشري A549، ومقارنة تأثير هذه المركبات مع عقار السيسبلاتين Cisplatin، وهو عقار كيميائي يستخدم في علاج عدة أنواع من امراض السرطان، حيث استخدم خط خلايا سرطان الرئة البشري A549 كنموذج لإجراء الاختبارات المطلوبة والتي شملت محورين، المحور الأول هو تقييم النشاط المضاد للورمAnti-tumor للمركبات الفعالة المعزولة من العكبر خلال فحص السمية الخلوية Cytotoxicity لكل مركب فعال على خط خلايا A549 ومقارنته مع عقار Cisplatin، أمَّا المحور الثاني فتمثل بمعرفة النشاط المُعدّل للمناعة Immunomodulatory activity عن طريق قياس نسبة مستوى التعبير عن بعض المعايير المناعية المتمثلة بـ Programmed death-ligand 1 (PDL-1) وCluster of differentiation 24 (CD24) وC-X-C chemokine receptor type 4 (CXCR4) على خط خلايا A549 قبل وبعد المعاملة بالمركبات الفعالة والعلاج الكيميائي. أجريت اختبارات الدراسة الحالية في مختبرات قسم علوم الحياة في كلية التربية للعلوم الصرفة / جامعة كربلاء، ومختبرات دائرة البيئة والمياه في وزارة العلوم والتكنلوجيا ومختبر الشركة العراقية للتقنيات الاحيائية ومختبر العراق التخصصي في محافظة بغداد للفترة الممتدة من بداية شهر نيسان 2022 إلى بداية شهر تشرين الثاني 2022.
تم الكشف عن المركبات الفعالة في المستخلص الايثانولي للعكبر عن طريق استخدام تقنية كروماتوغرافيا السوائل عالية الأداء High-performance liquid chromatography، ثم جمعت بشكل فردي باستخدام جهاز Fraction Collector المربوط بجهاز (HPLC)، وكشفت النتائج أن المركب الفعال (CA) هو المركب الأكثر تركيزاً في المستخلص، إذ كان تركيزه (69.58) mg/g، في حين بلغت التراكيز (48.97 و33.69) mg/g لكل من المركبين (CAPE وCHR) على التوالي.
تم الكشف عن التأثيرات السمية الخلوية Cytotoxicity لكل من السيسبلاتين والمركبات الفعالة المعزولة من العكبر على خلايا A549 من خلال استخدام فحص 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT)، وهو اختبار يستخدم في الزراعة الخلوية Cell culture، حيث تم تعريض الخلايا السرطانية لستة تراكيز مختلفة لكل مركب من المركبات المدروسة وهي (1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25) μg/mL، ولمدة (48) ساعة، وبينت النتائج وجود تأثيرات سمية خلوية لعلاج السيسبلاتين والمركبات الفعالة على خط خلايا A549، إذ لوحظ انخفاض كبير في عدد الخلايا السرطانية مع زيادة نسبة المئوية لمعدل التثبيط (Inhibition rate) بزيادة التركيز، حيث وصل أعلى تثبيط عند التركيز (1000) μg/mL عند المعاملة بعقار السيسبلاتين والمركبات الفعالة المستخلصة من العكبر، وبالمقارنة مع السيسبلاتين وباقي المركبات، فقد امتلك المركب (CA) أعلى نسبة تثبيط على خط خلايا سرطان الرئة عند التركيز (1000( μg/mL، حيث كانت (%76.300)، في حين كانت قيم النسب (%70.400 و%62.500 و%67.100) في (CIS وCAPE و(CHR على التوالي، كما كشفت النتائج عن وجود فروق معنوية (P ≤ 0.05) في التراكيز الستة لكل من للسيسبلاتين والمركب الفعال (CAPE) عند مقارنتها مع خلايا السيطرة Control، وكانت هنالك فروق معنوية (P ≤ 0.05) في التراكيز (1000, 500, 250, 125, 62.5) μg/mL للمركبين (CA و(CHR مع خلايا السيطرة Control، في حين لم تكن هنالك فروق معنوية (P > 0.05) في التركيز (31.2) μg/mL وخلايا السيطرة Control، كما أظهرت النتائج ان سمية عقار السيسبلاتين كانت أعلى من سمية المركبات الفعالة على خط خلايا A549 باستخدام التركيز المثبط لنصف عدد الخلايا (IC50)، إذ بلغ (43.75) μg/mL في علاج السيسبلاتين، بينما كانت قيم (IC50) (157.6 و249.3 و258.9) μg/mL في المركبات الفعالة المستخلصة من العكبر (CA وCAPE وCHR) على التوالي، ومن الجدير بالذكر كلما قل تركيز المركب المثبط لنصف عدد الخلايا (IC50) كانت سميته الخلوية أعلى والعكس صحيح.
قُدّرت قيم مستويات التعبير عن المعايير المناعية (PDL-1 وCD24 وCXCR4) على خط خلايا A549 باستخدام تقنية التدفق الخلوي Flow cytometry، حيث عوملت الخلايا السرطانية المزروعة في المختبر in vitro بالتركيز المثبط لنصف عدد الخلايا (IC50) لكل من السيسبلاتين والمركبات الفعالة المعزولة من العكبر لمدة (24) ساعة من التعرض، واظهرت النتائج ان مستويات التعبير عن (PDL-1 وCD24 وCXCR4) قد ارتفعت في خط خلايا A549 بعد معاملتها بتركيز (IC50) لعلاج السيسبلاتين، حيث بينت النتائج وجود فروق معنوية (P ≤ 0.05) في مستوى التعبير عن (PDL-1) في خلايا A549 المعاملة بعقار السيسبلاتين مقارنةً مع خلايا السيطرة Control، في حين بينت النتائج عدم وجود فروق معنوية (P > 0.05) في مستويات التعبير عن (CD24 وCXCR4)، مقارنة مع خلايا السيطرة Control، كما أوضحت النتائج وجود انخفاض كبير في مستويات التعبير عن (PDL-1 وCD24 وCXCR4) على خط خلايا A549 المعاملة بالتراكيز (IC50) للمركبين الفعالين (CA وCAPE)، إذ بينت النتائج وجود فروق معنوية (P ≤ 0.05) في التعبير عن البروتينات المناعية (PDL-1 وCD24 وCXCR4) على خط خلايا A549 المعاملة بالمركبين المذكورين مقارنة مع خلايا السيطرة Control، في حين كانت مستويات التعبير عن (PDL-1 وCD24 وCXCR4) في خلايا A549 المعاملة بالمركب (CHR) مرتفعة مقارنةً مع المركبين الاخرين للعكبر، إذ أظهرت النتائج وجود فروق معنوية (P ≤ 0.05) في مستوى التعبير عن (PDL-1) في خلايا A549 المعاملة بالمركب (CHR) مقارنةً مع خلايا السيطرة، بينما لم يكن هنالك فروق معنوية (P > 0.05) في مستويات التعبير عن (CD24 وCXCR4).
نستنتج مما تقدم أنَّ المركبات الفعالة المعزولة من العكبر (CA وCAPE وCHR) كان لها تأثيرات سمية خلوية ضد خلايا سرطان الرئة البشري A549 بتراكيز مختلفة وأنَّ التركيز (1000( μg/mL كان التركيز الأكثر فعالية للسمية الخلوية ضد خط خلايا سرطان الرئة البشري A549، بالإضافة إلى ذلك، كان للمركبات الفعالة المستخلصة من العكبر تأثيرات على انخفاض وارتفاع مستويات التعبير في بعض المعايير المناعية (PDL-1 وCD24 وCXCR4) على خط خلايا A549، وبالتالي يمكن تطوير هذه المركبات لإمكانية استخدامها كعلاجات طبية مساعدة للسيسبلاتين ضد أنواع مختلفة من مرض السرطان وخاصةً سرطان الرئة.