المستخلص
نُفذت الدراسة في كلية التربية للعلوم الصرفة / جامعة كربلاء للفترة من 1 /5 /2022 لغاية 1/6/ 2023. بهدف تثبيط بعض أنواع Candida spp.. الممرضة باستعمال الطريقة الحيوية في تصنيع جسيمات الفضة النانوية .
وقد تم عزل Candida spp. من أماكن مختلفة من محافظة كربلاء تمثلت بمستشفى النسائية والتوليد التعليمي ، مستشفى كربلاء التعليمي للأطفال ومستشفى الحسين التعليمي / وحدة غسل الكلى ومركز الاورام ، ومختبر الصحة العامة. وجميع هذه العينات هي عينات اخذت من أشخاص بالغين ( نساء ورجال ) بالإضافة الى عينات الأطفال يعانون من أمراض (التهاب المجاري البولية والكلى ،التهاب الجهاز التنفسي ،امراض الجهاز الهضمي المزمنة ، امراض الدم ،امراض نقص المناعة ،عمليات زرع الأعضاء او الانسجة ، التهابات الاسنان المزمنة وتركيب اطقم الاسنان بالإضافة لمرض السرطان بانواعه المختلفة ، والامراض النفسية بالإضافة الى الحمل لدى النساء)
تم الحصول على 93 عزلة مرضية لأنواع جنس المبيضات Candida spp.. وحسب المناطق التي اخذت منها 51 من الفم ،26 من المهبل ، 11 من مناطق حفاظ الأطفال و5 من الدم ، وبنسب مئوية حسب عدد عينات كل منطقة كانت : 63.7 % ،65 % ، 55 % و50 % على التوالي . كانت عدد عزلات النساء 40 عزلة بنسبة 66.7 % بالنسبة لعدد عينات النساء و نسبة 43 % بالنسبة لعدد العزلات الكلي ، وكانت الفئة العمرية من 20-30 سنة هي الأكثر اصابة وبلغ عدد العزلات منها 16 عزلة وبنسبة 26.7 % تلتها الفئة العمرية 60-70 سنة بـ 15 عزلة وبنسبة 25 % ، من جانب آخر بلغت عدد العزلات في الذكور 26 عزلة أي بنسبة 65 % بالنسبة لعدد عينات الرجال وبنسبة 27.9 % بالنسبة لعدد العزلات الكلية ، كانت الفئة العمرية 60-70 سنة هي الاعلى اصابة بـ11 عزلة وبنسبة 27.5 % بينما الفئة العمرية 40-50 سنة كانت أقل اصابة وأقل عدد عزلات بلغ 6 عزلات وبنسبة 15 % ، وفيما يخص عدد العزلات المعزولة من الأطفال المرضى فقد تم عزل 16 عزلة من 20 حالة من فم الأطفال أي بنسبة 80 % و 11 عزلة من 20 حالة من حفاظ الأطفال أي بنسبة 55% .
اظهرت نتائج تشخيص أنواع Candida على وسط كروم اكار Chromogenic agar انها تعود الى الانواع C.albicans بلون أخضر فاتح و C.tropecalis بلون أزرق و مستعمرات النوع C. parapsilosis بلون كريمي مائل للبياض وظهرت مستعمرات النوع C.glabrata بلون الارجواني في حين أن مستعمرة النوع C.dublineiensis ظهر بلون أخضر داكن وأظهرت مستعمرات C.ciferrii بلون وردي شاحب.
كذلك تم تأكيد تشخيص أنواع المبيضات المهمة سريريا باستعمال اختبارات جهاز الفايتك system Vitek2 Compact باستعمال عدد تشخيصية خاصة بالجهاز وحسب تعليمات الشركة المصنعة.
اوضحت نتائج التشخيص الجزيئي بانها تعود الى 13 عزلة مختلفة واعطيت لها ارقام تسلسلية في البنك الجيني العالمي وتمثلت بـست عزلات من C. albicans و سلالتين من C. t ropicali وسلالتين من C. parapsilosis وعزلة واحدة من C. glabrata وعزلة واحدة من C. dubiniensis وعزلة واحدة من C.ciferrii .
بينت نتائج التشخيص الجزيئي والمطابقة والتشابهات والاختلافات ان 10 انواع تم الحصول عليها في هذه الدراسة هي انواعا سُجلت لاول مرة في العراق كونها تحوي طفرات في بعض القواعد النتروجينية ، كما ان النوع C.ciferrii سُجل لأول مرة بالعراق .
بينت نتائج الدراسة النسبة المئوية لظهور أنواع المبيضات ان النوع C. albicans قد تفوق بعدد العزلات والتي بلغت 59 عزلة وبنسبة مئوية 63.4 % تلاها النوع C. glabrata بـ 14 عزلة وبنسبة 15 % في حين كان النوع C.ciferrii أقل الأنواع ظهورًا بـ 3 عزلات وبنسبة 3.2 % . كشفت نتائج اختبار عوامل الضراوة Virulence of factor test لخميرة C. albicans قدرتها على تكوين الغشاء الحيوي Biofilm والإنبوب الجرثومي Germ Tube والأبواغ الكلاميدية Chlamydospores كما بينت النتائج قدرة الخميرة C. albicans على النمو بدرجة حرارة 45 درجة مئوية .
اثبتت النتائج فعالية البكتريا Lactobacillus rhamnosus كعامل حيوي في تصنيع جسيمات الفضة النانوية وكفاءة هذه البكتريا في تصنيع الفضة النانوية من محلول نترات الفضة إذ بدأ التغير اللوني لمحلول نترات الفضة (2 مولاري ) بالتغير الى اللون البني بعد إضافة محلول البكتريا وكان هذا التغير يعد كدليل أولي على تصنيع الجسيمات النانوية ثم بعدها اجريت عدة فحوص للتأكد من تكوين الفضة النانوية مثل فحص حيود الأشعة السينية X-Rays Diffraction in Crystals أذ كشفت النتائج وجود أربعة قمم حيود واضحة عند قيم زوايا 2θ values هي: 38.6 ,44.8 ,64.4 و77.8 والتي كانت تقابل 111 ، 200 ، 220 و 311 وعلى التوالي من المخطط القياسي (Standard ) لحيود طيف الأشعة السينية XRD لجسيمات الفضة النانوية JCPDS silver: 04-0783) ) ، كما بينت نتائج الفحص بوساطة استعمال مجهر القوة الذرية Atomic Force microscopy (AFM) أنها كانت ذات أقطار حجوم تراوحت مابين ( 0.0- 76.53 ) نانومتر وبمعدل حجم للجسيمات النانوية 50.47 نانوميتر، كما بينت النتائج بإستعمال نفس المجهر خشونة سطح جسيمات الفضة النانوية التي صنعت بوساطة البكتريا ويظهر فيها أقصى معدل تراكمي لـ 56 جسيمة فضة نانوية هو 48.30 نانومتر وبنسبة تواجد 57.97 % في حين بلغت قيمة متوسط الجذر التربيعي لجسيمات الفضة النانوية 10.02 نانومتر.
كشفت نتائج تقييم فعالية أربعة مضادات فطرية هي 20 µg Amphotericin، Nystatin 100Iu ، 50 µg Ketoconazole و Clotrimazole 50 µg ، ضد 6 عزلات مختلفة شخصت جزيئيا من خميرة C. albicans على وسط السابرويد دكستروز الصلب Sabourand Dextrase Agar (SDA) إذ اوضحت النتائج أن نوعين من العزلات أبدت مقاومة لكل أنواع المضادات الفطرية وكانت هذه السلالتين C. albicans strain suhad 2 و C. albicans strain suhad 3 في حين العزلة رقم 6C. albicans strain suhad لم تبد أي مقاومة ضد المضادات الفطرية الأربعة ، في حين العزلة رقم 4 C. albicans strain suhad أبدت مقاومة ضد المضاد Ketoconazole ، ومن خلال هذه الدراسة تبين أن المضاد الفطري Clotrimazole كان أفضل أنواع المضادات إذ بلغ أعلى قطر تثبيط 40 مليمتر مع سلالتين C. albicans strain suhad 5 و6 C. albicans strain suhad و بينما بلغ التثبيط 36 مليمتر مع عزلة رقم 1 C. albicans strain suhad وفي عزلة رقم 4 C. albicans strain suhad بلغ قطر التثبيط 34 مليمتر مع وجود فروق معنوية
كما سجلت النتائج أن المضاد الفطري Amphotericin نوع B كان أقل المضادات تأثيرا في تثبيط عزلات الخميرة قيد الدراسة إذ سجل أقل أقطار تثبيط في العزلة رقم 1 ، 5 و6 وبأقطار تثبيط 10 ، 12 و16 مليمتر على التوالي .
بينت نتائج استعمال جسيمات الفضة النانوية المصنعة حيويًا بوساطة بكتريا L. rhamnosus كمضاد فطري ضد C. albicans على وسط SDA وبطريقتين هما طريقة الحفر وطريقة خلط جسيمات الفضة النانوية مع الوسط أو مايعرف بطريقة الغذاء المسموم ، إذ أوضحت النتائج وجود فروق معنوية بين التراكيز الثلاث المستخدمة في الدراسة كما أثبتت جسيمات الفضة النانوية الحيوية الحيوية قدرتها العالية على تثبيط C. albicans وفي جميع التراكيز إذ كان تركيز 25 ملي مولاري أكثر تركيز مثبط إذ بلغ قطر التثبيط 29 مليمتر في حين بلغ قطر التثبيط عند التركيز 5 ملي مولاري 15 مليمتر وعند التركزي 15 ملي مولاري بلغ التثبيط 20 مليمتر ، كما بينت نتائج اختبار فعالية الفضة النانوية بطريقة الخلط مع الوسط ضد C. albicans كفاءة التراكيز 40 و60 جزء بالمليون إذ ثبطا نمو C. albicans بشكل كبير وبنسبة 90 % و 100 % على التوالي كذلك لم يلحظ أي نمو في الأطباق حتى بعد ترك الأطباق لمدة 30 يوم في حين ظهرت آثار نمو خفيف جدا عند التركيز 20 جزء بالمليون وبنسبة 45 % .